TY  - GEN
AU  - Ćirković-Veličković, Tanja
AU  - Gnjatović, Marija
AU  - Ćujić, Danica
AU  - Todorović, Aleksandra
AU  - Stanić-Vučinić, Dragana
AU  - Đukić, Teodora
AU  - Mladenović, Maja
AU  - Vasović, Tamara
AU  - Stojadinović, Marija
AU  - Krstić-Ristivojević, Maja
AU  - Jovanović, Vesna
AU  - Simović, Ana
AU  - Radosavljević, Jelena
AU  - Aćimović, Jelena M.
AU  - Radomirović, Mirjana Ž.
AU  - Stojanović, Marijana
PY  - 2023
UR  - http://intor.torlakinstitut.com/handle/123456789/860
AB  - Novi korona virus (SARS CoV-2) koji se pojavio u Vuhanu 2019. godine pripada grupi jednolančanih RNK virusa [1]. Predstavlja novi infektivni agens za humanu populaciju i veoma je brzo detektovan u velikom broju zemalja. Uzročnik je respiratornih infekcija koje mogu da budu praćene i veoma teškom kliničkom slikom. Brzo širenje, odsustvo imuniteta na ovaj virus i odsustvo pouzdanih testova za detekciju virusa u trenutku izbijanja pandemije su bolest izazvanu ovim virusom brzo pretvorili u zdravstveni i društveni problem najvišeg prioriteta na globalnom nivou. Iako su najveće biotehnološke kompanije ubrzano počele sa razvojem i masovnom proizvodnjom dijagnostičkih testova i vakcina, njihova dostupnost u trenucima najveće potražnje je i dalje nedovoljna, a cene istih su limitirajući faktor za bolju kontrolu bolesti i širenja pandemije [2]. Razvoj sopstvenih i održiva proizvodnja testova i vakcina za COVID-19 su od velikog društvenog značaja. Važan preduslov za održivu proizvodnju testova je dostupnost rekombinantnih antigena virusa i mogućnost proizvodnje istih na velikoj skali za potrebe proizvodnje domaćih testova. Ovim tehničkim rešenjem se opisuje dobijanje dva ključna antigena novog korona virusa rekombinantnom tehnologijom i njihova primena u serološkom ELISA testu koji proizvodi Institut za primenu nuklearne energije, INEP, kao i za dobijanje reagenasa za detekciju antigena novog korona virusa (specifičnih antitela). U prvoj fazi, optimizovane su sekvence proteina koje su podigle osetljivost postojećih seroloških testova. Inovativnost našeg pristupa se ogleda i u razrađenim eksperimentalnim protokolima za dobijanje rekombinantnih proteina nukleokapsida na velikoj skali, kao i u solubilnoj formi, što olakšava postupak prečišćavanja. Izbor fragmenta nukleokapsida koji se heterologo eksprimira u solubilnoj formi, a specifično detektuje antitela i generiše jak imuni odgovor tokom imunizacije životinja (imunogenost) na osnovu pregleda poznatih epitopskih sekvenci je ključna inovacija ovog tehničkog rešenja. Ovo je prvi primer uspešno primenjenog rekombinatnog proteina proizvedenog u Srbiji u dijagnostičkom testu koji je registrovankod Agencije za lekove i medicinska sredstva Republike Srbije (broj rešenja 515-02-02370-21-002), a koji je primenu našao i na međunarodnom nivou.
T1  - Dobijanje rekombinantnog imunogenog fragmenta proteina nukleokapsida SARS-CoV-2 virusa za proizvodnju reagenasa i dijagnostičkih testova na novi korona virus
UR  - https://hdl.handle.net/21.15107/rcub_intor_860
ER  - 

@misc{
author = "Ćirković-Veličković, Tanja and Gnjatović, Marija and Ćujić, Danica and Todorović, Aleksandra and Stanić-Vučinić, Dragana and Đukić, Teodora and Mladenović, Maja and Vasović, Tamara and Stojadinović, Marija and Krstić-Ristivojević, Maja and Jovanović, Vesna and Simović, Ana and Radosavljević, Jelena and Aćimović, Jelena M. and Radomirović, Mirjana Ž. and Stojanović, Marijana",
year = "2023",
abstract = "Novi korona virus (SARS CoV-2) koji se pojavio u Vuhanu 2019. godine pripada grupi jednolančanih RNK virusa [1]. Predstavlja novi infektivni agens za humanu populaciju i veoma je brzo detektovan u velikom broju zemalja. Uzročnik je respiratornih infekcija koje mogu da budu praćene i veoma teškom kliničkom slikom. Brzo širenje, odsustvo imuniteta na ovaj virus i odsustvo pouzdanih testova za detekciju virusa u trenutku izbijanja pandemije su bolest izazvanu ovim virusom brzo pretvorili u zdravstveni i društveni problem najvišeg prioriteta na globalnom nivou. Iako su najveće biotehnološke kompanije ubrzano počele sa razvojem i masovnom proizvodnjom dijagnostičkih testova i vakcina, njihova dostupnost u trenucima najveće potražnje je i dalje nedovoljna, a cene istih su limitirajući faktor za bolju kontrolu bolesti i širenja pandemije [2]. Razvoj sopstvenih i održiva proizvodnja testova i vakcina za COVID-19 su od velikog društvenog značaja. Važan preduslov za održivu proizvodnju testova je dostupnost rekombinantnih antigena virusa i mogućnost proizvodnje istih na velikoj skali za potrebe proizvodnje domaćih testova. Ovim tehničkim rešenjem se opisuje dobijanje dva ključna antigena novog korona virusa rekombinantnom tehnologijom i njihova primena u serološkom ELISA testu koji proizvodi Institut za primenu nuklearne energije, INEP, kao i za dobijanje reagenasa za detekciju antigena novog korona virusa (specifičnih antitela). U prvoj fazi, optimizovane su sekvence proteina koje su podigle osetljivost postojećih seroloških testova. Inovativnost našeg pristupa se ogleda i u razrađenim eksperimentalnim protokolima za dobijanje rekombinantnih proteina nukleokapsida na velikoj skali, kao i u solubilnoj formi, što olakšava postupak prečišćavanja. Izbor fragmenta nukleokapsida koji se heterologo eksprimira u solubilnoj formi, a specifično detektuje antitela i generiše jak imuni odgovor tokom imunizacije životinja (imunogenost) na osnovu pregleda poznatih epitopskih sekvenci je ključna inovacija ovog tehničkog rešenja. Ovo je prvi primer uspešno primenjenog rekombinatnog proteina proizvedenog u Srbiji u dijagnostičkom testu koji je registrovankod Agencije za lekove i medicinska sredstva Republike Srbije (broj rešenja 515-02-02370-21-002), a koji je primenu našao i na međunarodnom nivou.",
title = "Dobijanje rekombinantnog imunogenog fragmenta proteina nukleokapsida SARS-CoV-2 virusa za proizvodnju reagenasa i dijagnostičkih testova na novi korona virus",
url = "https://hdl.handle.net/21.15107/rcub_intor_860"
}

Ćirković-Veličković, T., Gnjatović, M., Ćujić, D., Todorović, A., Stanić-Vučinić, D., Đukić, T., Mladenović, M., Vasović, T., Stojadinović, M., Krstić-Ristivojević, M., Jovanović, V., Simović, A., Radosavljević, J., Aćimović, J. M., Radomirović, M. Ž.,& Stojanović, M.. (2023). Dobijanje rekombinantnog imunogenog fragmenta proteina nukleokapsida SARS-CoV-2 virusa za proizvodnju reagenasa i dijagnostičkih testova na novi korona virus. .
https://hdl.handle.net/21.15107/rcub_intor_860

Ćirković-Veličković T, Gnjatović M, Ćujić D, Todorović A, Stanić-Vučinić D, Đukić T, Mladenović M, Vasović T, Stojadinović M, Krstić-Ristivojević M, Jovanović V, Simović A, Radosavljević J, Aćimović JM, Radomirović MŽ, Stojanović M. Dobijanje rekombinantnog imunogenog fragmenta proteina nukleokapsida SARS-CoV-2 virusa za proizvodnju reagenasa i dijagnostičkih testova na novi korona virus. 2023;.
https://hdl.handle.net/21.15107/rcub_intor_860 .

Ćirković-Veličković, Tanja, Gnjatović, Marija, Ćujić, Danica, Todorović, Aleksandra, Stanić-Vučinić, Dragana, Đukić, Teodora, Mladenović, Maja, Vasović, Tamara, Stojadinović, Marija, Krstić-Ristivojević, Maja, Jovanović, Vesna, Simović, Ana, Radosavljević, Jelena, Aćimović, Jelena M., Radomirović, Mirjana Ž., Stojanović, Marijana, "Dobijanje rekombinantnog imunogenog fragmenta proteina nukleokapsida SARS-CoV-2 virusa za proizvodnju reagenasa i dijagnostičkih testova na novi korona virus" (2023),
https://hdl.handle.net/21.15107/rcub_intor_860 .

TY  - CONF
AU  - Mladenović, Maja
AU  - Romanyuk, Nataliya
AU  - Smiljanić, Katarina
AU  - Jovanović, Vesna B.
AU  - Ćirković-Veličković, Tanja
PY  - 2021
UR  - http://intor.torlakinstitut.com/handle/123456789/773
AB  - Introduction: Shellfish allergy is one of the most common food allergies with a prevalence of 0.5%-2.5% in the general population. The most common allergen present in shellfish is tropomyosin. Detection of tropomyosin in seashells is a challenge because there are no specific antibodies for seashells’ tropomyosin. Our aim was to verify the presence of tropomyosin in Anadara seashells using an immunoproteomic approach and to investigate the level of cross-reactivity with shrimps.Methods and Results: Proteins from lyophilized seashells Tegillarca granosa (TG) and Anadara broughtonii (AB) were extracted in: RIPA buffer (1% Triton X-100, 1% sodium deoxycholate, 0,1% SDS, 150 mM NaCl, 50 mM Tris-HCl, 1mM EDTA) and Rehydration buffer (7M urea, 2M thiourea, 2% CHAPS and 10mM DTT). Protein concentration of extracts was determined by Bradford assay and SDS-PAGE. The presence of tropomyosin has been supported by commercial tropomyosin standard in 1D SDS-PAGE. With 1D immunoblot, it was possible to confirm the reactivity of seashells’ tropomyosin to rabbit anti-shrimp tropomyosin polyclonal antibodies, confirming its presence. Tropomyosin’s presence was also validated with 1D immunoblot using monoclonal antibodies. 2D electrophoresis showed that most of samples’ proteins are in acidic pI range with prevalence of spots in the range 35-50kDa, and, by comparing spots to 2D immunoblot with polyclonal antibodies, it is possible to confirm tropomyosin’s presence in Anadara seashells.Conclusions: We found that tropomyosin is present in both blood clam species. Both monoclonal and polyclonal antibodies raised against shrimp tropomyosin can detect seashells tropomyosin by immunoblot pointing to a potential antibodies cross-reactivity of allergic subjects to shrimps and seashells.
C3  - FoodEnTwin Symposium: Novel analytical approaches in food and environmental sciences, June 16-18, 2021 Belgrade, Serbia
T1  - Detection  and characterization of tropomyosin from Anadara Seashells using immunoproteomic aproach
EP  - 35
SP  - 35
UR  - https://hdl.handle.net/21.15107/rcub_intor_773
ER  - 

@conference{
author = "Mladenović, Maja and Romanyuk, Nataliya and Smiljanić, Katarina and Jovanović, Vesna B. and Ćirković-Veličković, Tanja",
year = "2021",
abstract = "Introduction: Shellfish allergy is one of the most common food allergies with a prevalence of 0.5%-2.5% in the general population. The most common allergen present in shellfish is tropomyosin. Detection of tropomyosin in seashells is a challenge because there are no specific antibodies for seashells’ tropomyosin. Our aim was to verify the presence of tropomyosin in Anadara seashells using an immunoproteomic approach and to investigate the level of cross-reactivity with shrimps.Methods and Results: Proteins from lyophilized seashells Tegillarca granosa (TG) and Anadara broughtonii (AB) were extracted in: RIPA buffer (1% Triton X-100, 1% sodium deoxycholate, 0,1% SDS, 150 mM NaCl, 50 mM Tris-HCl, 1mM EDTA) and Rehydration buffer (7M urea, 2M thiourea, 2% CHAPS and 10mM DTT). Protein concentration of extracts was determined by Bradford assay and SDS-PAGE. The presence of tropomyosin has been supported by commercial tropomyosin standard in 1D SDS-PAGE. With 1D immunoblot, it was possible to confirm the reactivity of seashells’ tropomyosin to rabbit anti-shrimp tropomyosin polyclonal antibodies, confirming its presence. Tropomyosin’s presence was also validated with 1D immunoblot using monoclonal antibodies. 2D electrophoresis showed that most of samples’ proteins are in acidic pI range with prevalence of spots in the range 35-50kDa, and, by comparing spots to 2D immunoblot with polyclonal antibodies, it is possible to confirm tropomyosin’s presence in Anadara seashells.Conclusions: We found that tropomyosin is present in both blood clam species. Both monoclonal and polyclonal antibodies raised against shrimp tropomyosin can detect seashells tropomyosin by immunoblot pointing to a potential antibodies cross-reactivity of allergic subjects to shrimps and seashells.",
journal = "FoodEnTwin Symposium: Novel analytical approaches in food and environmental sciences, June 16-18, 2021 Belgrade, Serbia",
title = "Detection  and characterization of tropomyosin from Anadara Seashells using immunoproteomic aproach",
pages = "35-35",
url = "https://hdl.handle.net/21.15107/rcub_intor_773"
}

Mladenović, M., Romanyuk, N., Smiljanić, K., Jovanović, V. B.,& Ćirković-Veličković, T.. (2021). Detection  and characterization of tropomyosin from Anadara Seashells using immunoproteomic aproach. in FoodEnTwin Symposium: Novel analytical approaches in food and environmental sciences, June 16-18, 2021 Belgrade, Serbia, 35-35.
https://hdl.handle.net/21.15107/rcub_intor_773

Mladenović M, Romanyuk N, Smiljanić K, Jovanović VB, Ćirković-Veličković T. Detection  and characterization of tropomyosin from Anadara Seashells using immunoproteomic aproach. in FoodEnTwin Symposium: Novel analytical approaches in food and environmental sciences, June 16-18, 2021 Belgrade, Serbia. 2021;:35-35.
https://hdl.handle.net/21.15107/rcub_intor_773 .

Mladenović, Maja, Romanyuk, Nataliya, Smiljanić, Katarina, Jovanović, Vesna B., Ćirković-Veličković, Tanja, "Detection  and characterization of tropomyosin from Anadara Seashells using immunoproteomic aproach" in FoodEnTwin Symposium: Novel analytical approaches in food and environmental sciences, June 16-18, 2021 Belgrade, Serbia (2021):35-35,
https://hdl.handle.net/21.15107/rcub_intor_773 .